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技術(shù)文章

詳細(xì)解析基因?qū)雰x的工作原理和特點

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  基因?qū)雰x采用整機(jī)一體化設(shè)計,操作簡單,顯示直觀,主要是利用電轉(zhuǎn)化來將DNA轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)胞、動植物細(xì)胞、酵母細(xì)胞中。與其它方法相比,電轉(zhuǎn)化法具有高重復(fù)性、高效率、操作簡易、可定量控制等優(yōu)點,已經(jīng)成為分子生物學(xué)基本技術(shù)。
 
  基因?qū)雰x的工作原理
  細(xì)胞電轉(zhuǎn)染(電轉(zhuǎn)),也叫細(xì)胞電穿孔 (electroporation),是把外源大分子物質(zhì)DNA、RNA、siRNA、蛋白質(zhì)等以及一些小分子導(dǎo)入細(xì)胞膜內(nèi)部的重要方法。
  在瞬間強(qiáng)大電場的作用下,溶液中細(xì)胞的細(xì)胞膜具有了一定的通透性,帶電的外源物質(zhì)以類似電泳的方式進(jìn)入細(xì)胞膜。由于細(xì)胞膜磷脂雙分子層的電阻很大,細(xì)胞外部電流場產(chǎn)生的細(xì)胞兩極電壓都被細(xì)胞膜承受,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)分到的電壓可以忽略不計,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)部幾乎沒有電流,因此也決定了正常范圍內(nèi)的電轉(zhuǎn)過程中細(xì)胞毒性很小。電場使DNA等物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞膜后只能停止在細(xì)胞膜附近,隨后細(xì)胞本身的機(jī)制可以允許這些物質(zhì)到細(xì)胞核等處。
  由于電轉(zhuǎn)技術(shù)依靠的是物理方法,細(xì)胞表面的分子特性對電轉(zhuǎn)影響比較小。相比化學(xué)轉(zhuǎn)染方法和病毒載體轉(zhuǎn)染方法,電轉(zhuǎn)可以用在所有的細(xì)胞種類上,而且容易定量控制。
 

 

  應(yīng)用領(lǐng)域:
  1.細(xì)菌、酵母及其他微生物的電轉(zhuǎn)化。
  2.導(dǎo)入藥物、蛋白、抗體等分子對細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)行研究。
  3.細(xì)胞雜交、融合基因?qū)搿?/div>
  4.導(dǎo)入標(biāo)記基因起到標(biāo)記、指示的作用。
  5.哺乳動物細(xì)胞的轉(zhuǎn)染、植物組織和原生質(zhì)體的轉(zhuǎn)染。
 
  基因?qū)雰x的性能特點:
  1.效率高:轉(zhuǎn)化時間短、轉(zhuǎn)化率高、重復(fù)性優(yōu)異。
  2.智能儲存:可存儲實驗參數(shù),方便用戶調(diào)取。
  3.控制精準(zhǔn):采用微處理器控制的脈沖放電。
  4.外形美觀:整機(jī)一體化設(shè)計,顯示直觀,操作簡單。

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